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天津本生|PCR八聯(lián)管試劑盒的清洗方法及注意事項
實(shí)驗方法原理:硅膠膜在高鹽條件下結合DNA,可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物,單核苷酸,酶,礦物油,鹽離子等被分離,因為它們與DNA沒(méi)有相似的性質(zhì)。
實(shí)驗材料:PCR產(chǎn)物,試劑,試劑盒,PCR清潔套件,儀器,消耗品,96孔DNA制備板96孔深孔板96孔V形板
一、PCR八聯(lián)管廠(chǎng)家談試劑盒的組成,儲存,穩定性
1、說(shuō)明書(shū),消耗品:96孔DNA制備板,96孔1.6ml深孔板,96孔V形板。
2、緩沖液PCR-A:DNA結合溶液。在室溫下以密封狀態(tài)儲存。如果發(fā)生沉淀,應將其溶解在65°C的溫浴中,并在使用前冷卻至室溫。
3、緩沖液W2濃縮液:除去鹽溶液。使用前,根據瓶子上的體積加入乙醇,充分混合,并在室溫下保存。可以使用100%乙醇或95%無(wú)水乙醇。
4.洗脫液:2.5mM Tris-HCl,pH 8.5,在室溫下以密封狀態(tài)儲存。
二、PCR八聯(lián)管操作步驟
用戶(hù)可以選擇負壓或離心。
A.負壓法
1、正確連接負壓裝置,將96孔DNA制備板放在負壓裝置上;在PCR,酶消化,酶標記或測序反應溶液中加入3倍緩沖液PCR-A(如果緩沖液PCR-A小于100μl,加入100μl);充分混合并轉移至96孔DNA制備板,打開(kāi)并調節負壓至-25-30英寸汞柱,并緩慢吸出板中的溶液。
2、加入0.3 ml緩沖液W2并吸收溶液。用相同的方法用0.3ml緩沖液W2洗滌兩次。
確認在試劑瓶上的體積的緩沖液W2濃縮物中加入無(wú)水乙醇。
3、維持負壓并提取96孔DNA制備板10分鐘。
4、在長(cháng)纖維組織上將96孔DNA制備板粉碎6次,引流管朝下。
5、將96孔DNA制備板置于96孔V形板上,加入25-30ul水或洗脫至膜中心,在室溫下靜置1分鐘。通過(guò)以3 000×g離心5分鐘洗脫DNA。
B.離心
1、在PCR,消化,酶標記或測序反應中加入3倍體積的Buffer PCR-A(如果Buffer PCR-A小于100μl,加100μl);混合并轉移到制備板96孔中的96孔DNA中。將DNA制備板置于96孔1.6ml深孔板中,以1000×g離心1分鐘,棄去濾液。
2、在96孔DNA制備板中,加入0.3ml緩沖液W2,以1000×g離心1分鐘,棄去濾液。用0.3ml緩沖液W2以相同方式再次洗滌。確認在試劑瓶上的體積的緩沖液W2濃縮物中加入無(wú)水乙醇。
3、將96孔DNA制備板置于96孔1.6ml深孔板中,并以3 000×g離心10分鐘。
4、將96孔DNA制備板置于干凈的96孔V形底板中,加入25-30ul水或洗脫至膜中心,在室溫下靜置1分鐘。通過(guò)以3 000×g離心5分鐘洗脫DNA。
PCR八聯(lián)管注意事項:
1、將洗脫液或水加熱至65°C有助于提高洗脫效率。
2、DNA分子是酸性的,建議儲存在2.5 mM Tris-HCl,pH 8.5洗脫液中。
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